Cloning, expression and characterization of SeM protein of Streptococcus equi subsp. equi and evaluation of its use as antigen in an indirect ELISA / Clonagem, expressão e caracterização de proteína SeM de Streptococcus equi subsp. equi e avaliação de sua utilização como antígeno em um ELISA indireto

Strangles is an economically important horse disease caused by Streptococcus equi subsp. equi. The diagnosis can be confirmed either directly by bacterial isolation and PCR or by ELISA, which is an indirect method based on the detection of serum antibodies. The aim of this study was to clone, express and characterize the SeM protein of Streptococcus equi subsp. equi, evaluate its use as antigen in indirect ELISA and determine its performance to distinguish sera of negative, vaccinated and positive animals. This was initially performed by cloning the gene encoding the SeM protein and its expression in Escherichia coli. Subsequently, the protein produced was characterized and used as antigen in ELISA. Serum samples for evaluation were taken from 40 negative foals, 46 horses vaccinated with a commercial vaccine against strangles and 46 horses diagnosed with the disease. The test showed high specificity and sensitivity, allowing discrimination between negative and positive, positive and vaccinated animals, and vaccinated animals and negative sera. Thus, it was concluded that the protein produced rSeM, which can be used as antigen for disease diagnosis, and the described ELISA might be helpful to evaluate the immune status of the herd...

A adenite equina é uma enfermidade economicamente importante de equinos, causada por Streptococcus equi subsp. equi. Seu diagnóstico pode ser confirmado de forma direta, por meio de isolamento bacteriano e de PCR, ou de forma indireta, por meio de ELISA, método baseado na detecção de anticorpos séricos. O objetivo deste estudo foi clonar, expressar e caracterizar a proteína SeM de Streptococcus equi subsp. equi, avaliar sua utilização como antígeno em um ELISA indireto e determinar a capacidade do teste de distinguir soros de animais negativos, vacinados e positivos. Para tal, foi inicialmente realizada a clonagem do gene que codifica para a proteína SeM e sua expressão em Escherichia coli. Posteriormente, a proteína produzida foi caracterizada e utilizada como antígeno em um teste de ELISA indireto. Para avaliação do teste, foram utilizadas amostras de soro de 40 potros negativos, de 46 equinos vacinados com uma vacina comercial contra adenite equina e de 46 equinos com diagnóstico da doença. O teste demonstrou alta sensibilidade e especificidade, permitindo discriminar entre soros negativos e positivos, positivos e de animais vacinados, e negativos e de animais vacinados. Assim, conclui-se que a proteína rSeM produzida pode ser usada como antígeno para o diagnóstico da enfermidade e que o ELISA descrito pode ser útil para avaliar o estado imunológico do rebanho...

Avaliaçäo de testes de ELISA para diagnóstico sorológico de infecçöes pelos sorotipos 3, 5 e 7 de Actinobacillus pleuropneumoniae em suínos / Evaluation of ELISAs for the diagnosis of Actinobacillus pleuropneumoniae infections serotypes 3, 5 e 7 in pigs

Compararam-se dois antígenos no teste de ELISA para o diagnóstico sorológico dos sorotipos 3, 5 e 7 de A. pleuropneumoniae prevalentes no Brasil. Um compunha-se de da fase aquosa da extraçäo fenólica de suspensäo bacteriana (FAF) e o outro de lipopolissacarídeos de cadeia longa (LPS-CL). Com esses antígenos foram padronizados ELISAs monovalente e polivalente para os sorotipos prevalentes no Brasil. Com os resultados dos testes de um conjunto de amostras de soro de suínos livres de infecçäo para A. pleuropneumoniae e um conjunto de amostras de soro obtidas de leitöes inoculados com os sorotipos citados e que apresentaram soroconversäo, determinaram-se as equaçöes discriminantes para os conjuntos de soros e compararam-se os testes quanto à distância generalizada de Mahalanobis, ao coeficiente de determinaçäo, ao teste F, ao coeficiente global, à sensibilidade e à especifidade. Na análise desses parâmetros observou-se que o antígeno FAF foi superior. Com o ELISA PFAF reaçöes positivas näo esperadas foram observadas com animais inoculados com os sorotipos heterólogos 2 e 9, näo observadas com o PLPS-CL. A sensibilidade dos testes polivalentes ficou entre 91,5 e 95,7 por cento com especifidade similar, indicando que ambos os testes säo adequados para triagem sorológica uma vez que detectam os sorotipos 3, 4, 5, 6, 7 e 8